چرا لازم است محصولات PCR قبل از تعیین توالی خالص شوند؟

2024 نویسنده: Stanley Ellington | [email protected]. آخرین اصلاح شده: 2023-12-16 00:16

تایید مورد نظر تولید - محصول است ضروری است ، که شامل تأیید عدم وجود غیر اختصاصی است محصولات و دایمرهای پرایمر. تمیز - تا مخلوط واکنش نیز می باشد لازم است برای حذف پرایمرهای ترکیب نشده و dNTP هایی که می توانند با واکنش های بعدی تداخل داشته باشند و منجر به یک توالی ناخوانا شوند.

علاوه بر این، چرا خالص سازی محصولات PCR ضروری است؟

شما نیاز دارید محصولات PCR را خالص کنید برای خلاص شدن از شر پرایمرها، نوکلئوتیدها و آنزیم های استفاده نشده به منظور بهینه سازی موفقیت در بستن، که باعث حفظ و توالی یابی می شود. تولید - محصول از PCR . به خالص - تصفیه را محصولات PCR ، کروماتوگرافی حذف اندازه استفاده می شود.

همچنین ممکن است بپرسید، آیا باید محصولات PCR را قبل از هضم اندونوکلئاز محدود خالص کنید؟ اکثریت محدودیت آنزیم ها فعال هستند PCR بافرها برای برنامه های شبیه سازی، تطهیر از محصولات PCR قبل از هضم است لازم است برای حذف DNA پلیمراز ترموفیل فعال موجود در PCR مخلوط DNA پلیمرازها ممکن است انتهای DNA بریده شده را تغییر داده و بازده بستن را کاهش دهند.

مردم همچنین می پرسند، چگونه محصولات PCR را برای توالی یابی آماده می کنید؟

توالی یابی مستقیم محصولات PCR

1. مطمئن شوید که قطعه مناسب را تقویت کرده اید.
2. شما باید تمام پرایمرهای PCR باقیمانده و نوکلئوتیدهای ترکیب نشده را حذف کنید.
3. اگر پرایمرهای PCR نیز پرایمر(های) توالی یابی هستند، مطمئن شوید که با شرایط ما مطابقت دارند.
4. نمونه را بیش از حد متمرکز نکنید!

آیا می توانید محصول PCR را توالی یابی کنید؟

مستقیم ترتیب دهی از محصولات PCR . ترتیب دهی فقط استفاده می کند یکی پرایمر به جای دو مورد استفاده شده در PCR . اگر انجام دهید هر دو پرایمر را حذف نکنید، شما خواهد شد دو تا بگیر دنباله ها روی یکدیگر قرار گرفته اند که قابل خواندن نیستند. استفاده از a اشکالی ندارد PCR آغازگر برای ترتیب دهی تا زمانی که با شرایط ما مطابقت داشته باشد.